Визначення життєздатності первинної культури клітин гліобластоми під впливом різних концентацій ендотеліального-моноцитактивуючого поліпептида ІІ (EMAP II) за допомогою фарбування трипановим синім

  • І. М. Шуба Державна установа «Інститут нейрохірургії ім. Акад. А. П. Ромоданова НАМН України», Україна, 04050, м. Київ, вул. П. Майбороди, 32 https://orcid.org/0000-0003-4385-4877
  • В. В. Лило Інститут молекулярної біології і генетики НАН України, Україна, 03143, м Київ, вул. Акад. Заболотного, 150 https://orcid.org/0000-0001-8626-3028
  • І. С. Карпова Інститут молекулярної біології і генетики НАН України, Україна, 03143, м Київ, вул. Акад. Заболотного, 150 https://orcid.org/0000-0002-8472-6452
  • О. Я. Главацький Державна установа «Інститут нейрохірургії ім. Акад. А. П. Ромоданова НАМН України», Україна, 04050, м. Київ, вул. П. Майбороди, 32 https://orcid.org/0000-0003-0889-9762
  • О. І. Корнелюк Інститут молекулярної біології і генетики НАН України, Україна, 03143, м Київ, вул. Акад. Заболотного, 150 https://orcid.org/0000-0003-0146-2832
DOI: https://doi.org/10.7124/FEEO.v37.1772
Ключові слова: цитокін EMAP II, первинна культура клітин гліоми, цитотоксичність, тест на виключення барвника трипанового синього

Анотація

Мета. Підтвердження встановленого раніше (МТТ-тестом) цитотоксичного потенціалу поліпептида EMAP II відносно первинної культури клітин гліобластоми за допомогою незалежного методу з використанням барвника трипанового синього, який широко застосовується для селективного фарбування клітин. Методи. Первинну культуру клітин, отриману з фрагментів тканини злоякісної гліоми після хірургічного втручання, обробляли EMAP II у різних концентраціях. Для визначення кількості життєздатних клітин, присутніх у клітинній суспензії, застосовували тест на виключення барвника трипанового синього. При цьому живі клітини, які мають непошкоджені клітинні мембрани, залишаються прозорими через виключення барвника, тоді як мертві клітини поглинають барвник і забарвлюються в голубий колір. Результати. Було зафіксовано цитотоксичний ефект EMAP II, який проявився в діапазоні високих концентрацій препарата 10 мкМ, 2 мкМ та 640 пМ. Висновки. Тест на виключення трипанового синього через свою простоту і доступність може бути використаний для попередніх скринінгових досліджень впливу EMAP II на клітини злоякісної гліоми, але він значно поступається МТТ-тесту за чутливістю та інформативністю.

Посилання

Louis D. N., Perry A., Wesseling P. et al. The 2021 WHO Classification of Tumors of the Central Nervous System: a summary. Neuro-Oncology. 2021. Vol. 23, No. 8. P. 1231–1251. https://doi.org/10.1093/neuonc/noab106.

Hilchie A. L., Hoskin D. W., Power Coombs M. R. Anticancer Activities of Natural and Synthetic Peptides. In: Matsuzaki K. (eds) Antimicrobial Peptides. Advances in Experimental Medicine and Biology. 2019. https://doi.org/10.1007/978-981-13-3588-4_9.

Eghtedari M., Jafari Porzani S., Nowruzi B. Anticancer potential of natural peptides from terrestrial and marine environments: A review. Phytochem. Lett. 2021. 42. P. 87–103. https://doi.org/10.1016/j.phytol.2021.02.008.

Xie M., Liu D., Yang Y. Anti-cancer peptides: classification, mechanism of action, reconstruction and modification. Open Biol. 2020. https://doi.org/10.1098/rsob.200004.

Schwarz M. A., Kandel J., Brett J. Stern D. Endothelial-monocyte activating polypeptide II, a novel antitumor cytokine that suppresses primary and metastatic tumor growth and induces apoptosis in growing endothelial cells. J Exp Med. 1999. 190 (3). P. 341–354. https://doi.org/10.1084/jem.190.3.341

Van Horssen R., Eggermont A. M., ten Hagen T. L. Endothelial monocyte-activating polypeptide-II and its functions in (patho)physiological processes. Cytokine Growth Factor Rev. 2006. 17 (5). P. 339–348. https://doi.org/10.1016/j.cytogfr.2006.08.001

Ivakhno S. S., Kornelyuk A. I. Cytokine-like activities of some aminoacyl-tRNA synthetases and auxiliary p43 cofactor of aminoacylation reaction and their role in oncogenesis. Exp Oncol. 2004. Vol. 26 (4). P. 250–255.

Shuba I. M., Lylo V. V., Karpova I. S., Glavatskyi O. Ya., Kornelyuk A. I. Cytotoxic effect of the endothelial-monocyte activating polypeptide II on glioma cells in vitro. Biopolymers and Cell. 2024. Vol. 40 (4). P. 245–328. https://doi.org/10.7124/bc.000B08.

Dubrovsky A. L., Brown Jn., Kornelyuk A. I., Matsuka G. Kh. Bacterial Expression of Full Length and Truncated Forms of Cytokine EMAP2 and Cytokine Like Domain of Mammalian Tyrosyl tRNA Synthetase. Biopolym Cell. 2000. 16. P. 229–235. https://doi.org/10.7124/bc.00056B. [in Ukrainian]

Curr Protoc Immunol. Trypan Blue Exclusion Test of Cell Viability. 2015. 111. A3.B.1–A3.B.3. https://doi.org/10.1002/0471142735.ima03bs111.

Kim J. S., Nam M. H., An S. S., Lim C. S., Hur D. S., Chung C. Comparison of the automated fluorescence microscopic viability test with the conventional and flow cytometry methods. J Clin Lab Anal. 2011. 25. P. 90–94. https://doi.org/10.1002/jcla.20438.